Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1同型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次经常出现人体内自身抗棒状到经常出现1标准型肾病药理学病因的的发展率在学童时期就有很好的刻画，多个人体内自身抗棒状中都性的学童中都有70%在抗体类比后10年内患上肾病，而随访15年的学童这一%-减小到84%。比起之下，占药理学1标准型肾病一半以上的标准型1标准型肾病的中风有助于还很难得不到更好的研究工作。

越来越多的人开始用到分期系统来定义1标准型肾病的的发展：个棒状在经常出现多种人体内自身抗棒状时转到第1过渡阶段，经常出现浓度异常时转到第2过渡阶段，经常出现病因时转到第3过渡阶段。一些多发人体内自身抗棒状中都性的个棒状，在1期和2期，的发展较较慢，并发展为中风的1标准型肾病。我们之前刻画了一分组在首次扫描到多种人体内自身抗棒状样品后至寡10年无肾病的极较慢的发展者，这分组病人人数寡，但特点颇为明确。随后，我们发现人体内自身抗原抗原CD8+T细胞内催化在的发展快速的病人中都基本不存在，但在近期中风和长期存在的肾病病人中都很难以扫描到。这可能暗示，与的发展病人比起，这些病人致病催化的可调弱化。

中期研究工作暗示，尽管可调性T细胞内(Treg)数量正常，但肾病病人存在一些有助于缺陷，其中都仅限于对IL-2的催化能力降低。此外，肾病病人中都的现像CD4+T细胞内可能对可调更具抵抗性，平庸为现像T细胞内的抑制作用减弱，自然造成了的Treg和棒状外造成了的作用于Treg，以及抗原经历的CD4+T细胞内中都IL-2催化减弱。本研究工作的目的是刻画了CD4+可调性T细胞内(Treg)在一小群极快速的发展者中都的特点，他们的平均岁数为43岁(31-72岁)，随访一段时间为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以人群为基础的中轴研究工作，在21岁下述肺癌的病人亲属中都健康检查1标准型肾病的危险因素。我们之前刻画了长期快速的发展者的特点，他们保持多重人体内自身抗棒状中都性超过10年，但很难经常出现肾病的药理学病因，较慢性或非透过性致病。随后，10名继续保持无肾病并愿意提供者大量尿液样品的快速的发展者纳入T和B细胞内有助于系统性。在目前的研究工作中都，8名较慢的发展者(SP分组)，中都位岁数43岁(31-72岁)，18 - 32岁密切关系的人体内自身抗棒状中都性。所有的行动者都处于1标准型肾病的发展的1期，尽管一些人随后失去了人体内自身抗棒状对某些抗原的中都性催化，然而，一名病人从未处于2期至寡6年，但很难经常出现药理学病因，一名病人被诊断为肾病，该人脑72岁，在收集实验者样品时，其HbA1c消退到53 mmol/mol(7%)，在数据系统性中都对该供棒状透过了分开评核。裂解外周血单个质子细胞内(PBMCs)，采用多参数流式细胞内精和T细胞内抑制作用试验评核供棒状中都Treg的阈值、表标准型和有助于。用到FlowSOM和CITRUS(聚类核对、相关联和回归)透过无监督聚类系统性，评核Treg表标准型。

结果：与卫生供棒状比起，来自较慢的发展棒状的清醒CD4+T细胞内的监督聚类推断，触发的清醒CD4+ Treg阈值减小，与糖皮质激素作用于的TNFR相关酶(GITR)隐含减小有关。一名HbA1c消退的病人与的发展快速者和类比的对照分组比起，Treg谱有所不同。有助于系统性暗示，与卫生供棒状比起，来自快速的发展棒状的Treg介导的CD4+现像T细胞内抑制作用明显受损。平庸为对现像CD4+T细胞内CD25和CD134隐含的抑制作用减小。

三幅1 了解的表标准型系统性推断，CD4+Treg亚标准型在较慢的发展配置文件中都减小。由FlowSOM填充的Treg室，聚集在来自所有供棒状的已逝CD4+CD45RA -细胞内上。根据标上物隐含核对出10个元簇:清醒T细胞内_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T细胞内;HLA-DR + GITR +清醒T细胞内;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)用到9个不同Treg标上填充的10个元簇的MST。每个链表推选一个战斗群(100个战斗群)，更大的元战斗群(10个元战斗群)在链表分组周围上色。每个链表中都的饼三幅声称单个标上的隐含分级。(b)每个元聚类的热三幅，以推断整棒状标上隐含。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)填充三幅，以及FlowSOM标记的每个元簇的覆盖层。(e-l)相相对丰度为每个metacluster装入线三幅(丰度> 0.05%)确定为HD和SP分组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T细胞内(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T细胞内(l)。紫色圆点推选捐赠者SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对下标秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 用到CITRUS的数据系统性证实，Treg阈值的减小是的发展快速的logo。分级旁路(a - f)和大豆系统性(g-k)相对SP行动者和类比的HD行动者在CD4+CD45RA−T细胞内上的差异性。(a)特异性CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群棒状的推选性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR隐含透过裂解，模拟FlowSOM群棒状。(b) HD(外缘)和SP(蓝点)分组以及供棒状SP 606(紫色)中都CD25+ cd127的阈值汇总三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+旁路邻域的装入线三幅;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)柑橘簇球状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含强度着色，圆点突出的簇被标记为SP和HD配置文件密切关系的不同。(j)装入线三幅推断了在SP(蓝点)和HD(灰点)分组中都，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相相对丰度(%-)。(k)直方三幅推断每个簇的表标准型(黑色)和Treg标上相相对隐含与背景隐含(浅蓝色);上列，存储器Treg_3;下面一行，存储器Treg_4。背景与所有其他簇中都标上的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对下标秩检验

三幅3 与卫生献血者比起，的发展快速者清醒treg的GITR减小。每个清醒CD4+T细胞内元簇(清醒T细胞内_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T细胞内;HLA-DR + GITR +清醒T细胞内;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个隐含标上的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)配置文件的隐含热三幅(sp606不仅限于在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇中都所有HD(蓝灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR隐含接在，推断直方三幅(c)和汇总三幅(d)。Wilcoxon配对下标秩和检验，p< 0.07(紫色)所有供棒状仅限于，p< 0.05(浅蓝色)供棒状SP 606和类比的HD不仅限于在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR隐含，从分级旁路，从所有HD(蓝灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(紫色)接在，推断直方三幅(e)和汇总三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对下标秩检验

三幅4 来自快速的发展的CD4+ treg细胞内控制现像CD4+T细胞内的能力降低。SP分组用浅蓝色的线和圆点声称，HD分组用黑色的线和圆点声称，紫色的线/圆点声称供棒状sp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内透过分选。CD4+CD25−(接收者者)被标上为CFSE, Treg按观察的%-试样。用抗CD3 /28微珠触发细胞内，培养出来3天内透过流式细胞内精扫描。(a-d)与CD4+接收者者相相对应的treg培养出来(自棒状)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者培养出来。(a,b,f) CFSE裂解(a,e)和CFSE抑制作用百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用百分比。用到中都性对照(触发的响应细胞内下同treg)计算出来抑制作用百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相对测试

三幅5 现像CD4+T细胞内对快速的发展的T细胞内触发的抑制作用更敏感。SP分组用浅蓝色的线和圆点声称，HD分组用黑色的线和圆点声称，紫色的线/圆点声称供棒状sp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内透过分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel标上，treg按观察的%-试样。用抗CD3 /28微珠触发细胞内，培养出来3天内透过流式细胞内精(CD25反染)和细胞内因子系统性。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者都由培养出来。(a,b) CFSE裂解(a)和CFSE抑制作用三份(b)。(c,d) CD25抑制作用三份(c)和CD134抑制作用三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养出来中都的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相对测试

事实：我们证明了的事实是，来自快速的发展子的触发清醒CD4+Treg在GITR隐含中都得不到了扩展和丰富，强调了更进一步研究工作Treg在1标准型肾病后果个棒状中都的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28